期刊简介
本学报是以反映首都医科大学各院、系、所及10任所附属、教学医院的科研成果为主的高级综合性学术期刊。季刊，国内外公开发行。主要栏目有论著、经验介绍、技术·方法、综述等。
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首页>首都医科大学学报杂志
- 杂志名称：首都医科大学学报杂志
- 主管单位：北京市教育委员会
- 主办单位：首都医科大学
- 国际刊号：1006-7795
- 国内刊号：11-3662/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：全国优秀科技期刊三等奖（第二届）期刊收录：维普收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
反转录巢式多重聚合酶链式反应体系检测单细胞中时钟基因表达
袁艳鹏；关云谦；林庆玲；薛金花；蔡彦宁
关键词：反转录巢式多重聚合酶链式反应, 时钟基因, 单细胞, NIH/3T3
摘要：目的 建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nested reverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系.方法 选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,per2,cry1和cry2,以及看家基因β-actin,分别设计和优化巢式引物对.以基因质粒为模板,检测巢式多重PCR体系的灵敏度.体外转录得到各个基因的RNA模板,并检测反转录巢式多重PCR体系的灵敏度.使用手动微操作器,显微镜下负压获取悬浮单个NIH/3T3细胞,使用反转录巢式多重PCR体系检测其中目的时钟基因.应用实时定量PCR检测整体水平时钟基因表达情况,与单细胞水平进行比较.结果 巢式多重PCR检测体系可以检测出单拷贝质粒DNA.反转录巢式多重PCR能够检测出4拷贝RNA模板.利用上述体系发现,NIH/3T3单细胞中时钟基因环路表达存在很大差异,同时发现群体水平per1和per2表达的高峰和低谷间差异有统计学意义,而单细胞水平per1表达则差异无统计学意义.结论 建立了高度灵敏的用于检测时钟基因表达的反转录巢式多重PCR体系,揭示了单细胞水平时钟基因表达的异质性,也验证了整体水平与单细胞水平时钟基因表达的差异.
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